O que é uma pipeta?
As pipetas são o principal meio de transferência de líquidos, geralmente em volumes de mililitros e microlitros, para tubos de ensaio, microplacas e frascos cônicos para análise, armazenamento ou mistura. As pipetas aspiram um volume de líquido selecionado pelo usuário – amostras, reagentes, meios – de um recipiente e, em seguida, dispensam o volume definido de líquido em outro recipiente, de acordo com os procedimentos operacionais padrão. Pipetas, ou pipetadores, estão disponíveis em uma ampla variedade de designs (canal único ou multicanal), faixas de volume e sistemas de controle (mecânicos e eletrônicos) para diferentes aplicações e níveis de experiência.
Pipeta volumétrica (também conhecida como “pipeta de deslocamento de ar” ou “pipeta mecânica”)
As pipetas volumétricas lembram rolos de massa finos com barrigas grandes, rombas em uma extremidade e cônicas na ponta. Normalmente, essas pipetas são usadas para fornecer volumes únicos e específicos entre 1 e 100 mililitros, nos quais são calibradas. Essas pipetas de vidro oferecem mais precisão do que as pipetas Pasteur e pipetas de transferência, enfatizando o outro aspecto da pipetagem, além da transferência e entrega de líquidos – medição. Por ter a protuberância intermediária onde a maior parte do líquido é armazenada e o marcador de volume único na porção fina, os erros de precisão são extremamente reduzidos. O diâmetro estreito da porção fina torna os erros mais óbvios e fáceis de apontar.
Com esses tipos de pipetas, os procedimentos exigem o uso de bulbos de pipeta separados, dispositivos que fornecem sucção. O bulbo de borracha comum é bastante simples e fácil de usar – em forma de balão do tamanho de um punho, o bulbo de borracha é apertado e tocado na boca da pipeta, enquanto a ponta da pipeta é colocada no líquido. O líquido sobe à medida que a pressão no bulbo é liberada lentamente. Outras ferramentas semelhantes, como enchimentos de segurança para pipetas e auxiliares de pipetagem, também têm a mesma finalidade.
Como isso é usado?
Primeiro, segure a pipeta na parte superior usando o polegar, o mindinho, o anelar e o dedo médio. Liberte o dedo indicador. Com a outra mão, aperte o bulbo de borracha e toque sua abertura na boca superior da pipeta. Insira no máximo meio centímetro da pipeta no bulbo de borracha. Em seguida, mergulhe a ponta da pipeta no líquido e solte lentamente a pressão da mão no bulbo de borracha. O líquido será então aspirado para a pipeta. Uma vez que a superfície curva do líquido, chamada menisco, atinge a medição alvo, remova o bulbo e deslize rapidamente o dedo indicador livre sobre a ponta da boca da pipeta. Com o dedo ainda firmemente fechado na pipeta, retire a pipeta do líquido e coloque-a no recipiente receptor. É uma opção segura sempre coletar mais do que, mas o mais próximo possível, da marca de graduação para que os ajustes possam ser feitos facilmente. Observando a pipeta na altura dos olhos, levante cuidadosamente o dedo indicador para diminuir o líquido e atingir a quantidade desejada. Dependendo das propriedades físicas do líquido, o menisco pode ser côncavo ou convexo – em ambos os casos, o centro do menisco é utilizado como base para a medição.
Pipeta Mohr (Pipeta graduada) e sorológica
Ao contrário das pipetas volumétricas, as pipetas de medição são tubos de vidro finos calibrados em pequenas divisões de faixa de volume para que diferentes quantidades de líquido possam ser medidas e transferidas. Os dois tipos de pipetas de medição – Pipetas Mohr e pipetas sorológicas – diferem de acordo com a colocação das graduações. Nas pipetas Mohr, as graduações sempre terminam antes da ponta cônica, enquanto nas pipetas sorológicas, as graduações continuam até a ponta.
Como eles são usados?
O procedimento de transferência de líquidos nas pipetas de medição é semelhante ao das pipetas volumétricas, necessitando do uso de bulbos de borracha ou auxiliares de pipeta. Com pipetas de medição, também é recomendado que o volume de líquido a ser coletado seja maior, mas mais próximo da medição alvo, para que os ajustes possam ser feitos facilmente.
Micropipetas Automáticas: A invenção da micropipeta por Heinrich Schnitger em 1957 abriu o caminho para a medição de volumes menores em unidades de microlitros através de uma tecnologia automática de botão e pistão. Com o pressionar de um êmbolo retrátil ou botão, a aspiração, distribuição e purga de líquidos são simplificadas. A micropipeta automática também é altamente especializada – ao contrário de medir manualmente o líquido para alinhar até uma marca de graduação, como é tradição nas pipetas comuns, as micropipetas automáticas permitem ao cientista definir previamente o volume de líquido que precisa ser transferido através de um volumétrico digital.
Todas as micropipetas funcionam como uma seringa automática, mas os dois tipos principais – a pipeta de deslocamento de ar e a pipeta de deslocamento positivo – diferem com base na presença de uma almofada de ar entre o pistão da pipeta e a amostra líquida.
Pipeta Pasteur
Além de sua invenção mais popular do processo de pasteurização, também devemos agradecer a Louis Pasteur pela primeira pipeta já inventada. Como fundador da microbiologia médica e proponente da Teoria dos Germes, era então importante para Pasteur e as suas experiências que as coisas fossem mantidas limpas e livres de germes: daí a invenção da primeira pipeta. A pipeta Pasteur, que são os conhecidos conta-gotas químicos que ainda encontramos no uso diário, foi então projetada apenas para evitar a contaminação na transferência de pequenas quantidades de líquidos. A adição de tetinas de borracha nas extremidades de tubos de vidro longos e finos tornou a aspiração e distribuição de líquidos uma tarefa rápida e fácil. Hoje, essas pipetas são usadas para a transferência de volumes brutos e não calibrados de líquidos de até 2,5 mililitros.
Como isso é usado?
Aperte a tetina de borracha da pipeta Pasteur com o polegar e o indicador e mergulhe a ponta da pipeta na superfície do líquido. Em seguida, libere lentamente a pressão na tetina de borracha e espere o líquido subir. Assim que a pressão for liberada e a quantidade adequada de líquido for aspirada, leve a pipeta Pasteur cheia até o recipiente receptor e aperte novamente a tetina de borracha para dispensar o líquido na lateral da parede do recipiente.
A pipeta de transferência
As pipetas de vidro de Pasteur foram um sucesso do século XIX, mas surgiram problemas devido à fragilidade do seu material. A invenção dos plásticos na década de 1940, portanto, abriu caminho para uma modificação no design original da pipeta – as pipetas Pasteur de plástico, também chamadas de pipetas de transferência, eram peças únicas de plástico moldado fabricadas pelo processo de moldagem por sopro em polietileno de baixa densidade. Tanto a haste quanto o bulbo fazem parte de uma única peça de plástico, no lugar do acessório de borracha nas pipetas de vidro. Hoje, essas pipetas de transferência descartáveis são fabricadas em diversos tamanhos e formatos, e algumas incluem marcas de graduação para calibrações aproximadas de volume. Observe, entretanto, que embora as pipetas de transferência possam ser perfeitas para uso com soluções aquosas, solventes orgânicos como a acetona podem dissolver o material plástico.
Como isso é usado?
As pipetas de transferência usam um procedimento semelhante ao da pipeta Pasteur, mas em vez de uma tetina de borracha, o bulbo de plástico é comprimido.
As variedades de pipetas complexas e sofisticadas que oferecem mais exatidão e precisão do que as pipetas Pasteur. As pipetas de transferência enfatizam o outro aspecto da pipetagem, além da transferência e entrega de líquidos – medição. E, embora seja considerada um instrumento confiável de alta precisão, a pipeta não atinge exatidão e precisão por si só. Uma ferramenta é tão boa quanto o seu usuário e, no contexto laboratorial, o usuário da pipeta deve estar bem preparado e ter conhecimento das técnicas comuns de pipetagem para aproveitar ao máximo seus recursos. Mais importante ainda, espera-se que os cientistas tomem decisões informadas ao selecionar qual pipeta usar.
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